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急性吸入暴露染毒實驗

急性吸入暴露染毒實驗(Acute Inhalation Toxicity),是所實驗動物在短時間(24h內)持續吸入一種可吸入性受試樣品後,在短期內出現的健康損害效應。由於短時間內即可觀察到動物的毒性反應或致死情況,為後續動物實驗設計提供了重要的參考,在化學物質的毒性鑒定或動物模型的建立中都有著重要作用。
適用範圍
適用於各種氣體、揮發性物質或氣溶膠/顆粒物等化學品的急性吸入毒性鑒定;
適用於各種毒性物質動物毒性效應評價,及動物模型的建立。
實驗目的
檢測化學品對實驗動物的急性吸入毒性作用和強度。
為亞急(慢)性等吸入毒性試驗提供劑量選擇的依據。
實驗基本原則
各試驗組動物在一定時間內吸入不同濃度的受試樣品,染毒濃度的選擇可通過預試驗確定。染毒後觀察動物的毒性反應和死亡情況。試驗期間死亡的動物要進行屍檢,試驗結束時仍存活的動物要處死並進行大體解剖。
實驗方法
1、實驗動物
優選健康成年小鼠(18g~22g)和大鼠(180g~220g),也可選用其它敏感動物。同性別各劑量組個體間體重相差不得超過平均體重的20%。試驗前動物要在試驗環境中至少適應 3~5d時間。
2、 劑量設計
根據所選方法的要求,原則上應設4~5個劑量組,每組動物一般為10隻,雌雄各半。各劑量組間距大小以兼顧產生毒性大小和死亡為宜,通常以較大組距和較少量動物進行預試。如果受試樣品毒性很低,也可采用一次限量法,即用20隻動物(雌雄各半),10000 mg/m3吸入2h或 5000 mg/m3吸入4h,如未引起動物死亡,則不再進行多個劑量的急性吸入毒性試驗。
3、染毒:口鼻式吸入暴露染毒法
口鼻式吸入暴露染毒是采用機械通風裝置,連續不斷地將含有一定濃度受試樣品的空氣均勻不斷地送入暴露染毒腔室,經連接到染毒腔室上呈輻射狀小動物固定器,把染汙氣體或各種氣溶膠暴露到小動物呼吸道,實現動物快速的毒性反應或死亡(詳見www.nailbutter.com )。空氣交換量一般不低於12~15次/h,並排出等量的染毒氣體,維持相對穩定的染毒濃度(對通過染毒腔室的流動氣體應不間斷地進行監測,並至少記錄2次,同時根據需求,可對染毒腔室內的溫度、濕度、壓力、氣溶膠濃度計粒徑等參數進行監測)。一次吸入性染毒2h。當受試化合物需要特殊要求時,應用其它的氣流速率。染毒時,染毒腔室內應確保至少有19%的氧含量和均衡分配的染毒氣體。一般情況下,為確保染毒腔室內空氣穩定,實驗動物的體積不應超過染毒腔室體積的5%。且染毒腔室內應維持微弱的負壓,以防受試樣品泄露汙染周圍環境。同時,應注意防止受試樣品爆炸。
3.1 受試樣品氣化(霧化)和輸入的常用方法:
3. 1.1 氣體受試樣品:經流量計與空氣混合成一定濃度後,直接輸人染毒腔室;
3.1.2 VOCs:通過空氣鼓泡或適當加熱促使揮發後輸人染毒腔室;
3.1.3 液體物質:可采用二流相霧化(使用含活性物質的樣品)或超聲霧化器使其霧化後輸入染毒腔室;
3.1.4 香煙煙霧:科研用全自動香煙發生器,必須具有模擬人類吸煙方式的抽吸模式;
3.1.4 顆粒物質:采用顆粒物發生器或納米發生器生成所需粒徑的氣溶膠。
4 觀察期限及指標
4.1 觀察並記錄染毒過程和觀察期內的動物中毒和死亡情況。觀察期限一般為14d,觀察指標見附錄1-A,LC50的計算見附錄1-B。
4.2 對死亡動物進行屍檢。觀察期結束後,處死存活動物並進行大體解剖,如有必要,進行病理組織學檢查。
5 試驗結果評價
評價試驗結果時,應將LC50與觀察到的毒性效應和屍檢所見相結合考慮,LC50值是受試樣品急性毒性分級和標簽標識以及判定受試樣品經呼吸道吸入後引起動物死亡可能性大小的依據。引用LC50值時一定要注明所用實驗動物的種屬、性別、染毒方式及時間長短、觀察期限等。評價應包括動物接觸受試樣品與動物異常表現(包括行為和臨床改變、大體損傷、體重變化、致死效應及其它毒性作用)的發生率和嚴重程度之間的關係。
 實驗結果的解釋
通過LC50的測定,可評價受試樣品的急性吸入毒性及其毒性分級,或通過解剖等進一步實驗評價毒性物質的毒性效應。一般情況,急性吸入暴露染毒實驗僅用於毒性鑒定或毒性效應評價的實驗初始設計階段,進一步的評價還需慢性暴露染毒實驗或細胞或分子水平暴露染毒實驗等諸多驗證。
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